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如何區(qū)分各種PCR技術(shù)?

 更新時間:2023-09-08 點擊量:817

PCR是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),PCR技術(shù)有很多,那么我們應(yīng)該如何區(qū)分各種PCR技術(shù)呢?讓我們一起來看看吧!

一、普通PCR

PCR是普通PCR,以雙鏈DNA為模板,以dNTP為底物,特異性地擴增雙鏈DNA。然后采用瓊脂糖凝膠電泳對產(chǎn)物進(jìn)行檢測,只能做定性分析。

二、實時熒光定量PCR

qPCR和Real-time PCR是實時熒光定量PCR,以cDNA為模板,以dNTP為底物,對擴增出的DNA進(jìn)行定量分析。實時熒光定量PCR常用的方法:水解探針法和熒光染料法。

三、逆轉(zhuǎn)錄PCR

RT-PCR 是逆轉(zhuǎn)錄PCR,采用 Oligo(dT) 或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成 cDNA,再以 cDNA 為模板進(jìn)行 PCR 擴增,結(jié)果只能定性,不能定量。

四、實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR

RT-qPCR是實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR,是qPCR+RT-PCR的組合,將總RNA或mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后再作為模板,以dNTP為底物,進(jìn)行qPCR的定量分析。

五、數(shù)字PCR

dPCR是數(shù)字PCR即三代PCR,是一種能夠?qū)崿F(xiàn)核酸絕對定量的精準(zhǔn)檢測技術(shù),基于泊松分布原理將核酸樣品分配到大量獨立、平行的微反應(yīng)單元(納升級)中,使每個反應(yīng)室中平均只有一個拷貝或者沒有目標(biāo)DNA分子,然后加入熒光信號進(jìn)行擴增,從而實現(xiàn)靶標(biāo)核酸分子的絕對計數(shù),提高檢測靈敏度和準(zhǔn)確度。

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